PCR儀溫度校準(zhǔn)說(shuō)明
瀏覽次數(shù)：3879發(fā)布日期：2020-09-22
PCR儀溫度校準(zhǔn)說(shuō)明
PCR儀溫度校準(zhǔn)是一種用來(lái)放大特定的DNA時(shí)間段的儀器，主要采用的是半導(dǎo)體熱泵制冷技術(shù)以及膜加熱技術(shù)，保證了升溫速度的穩(wěn)定和快速。
PCR技術(shù)能快速地在體外試管內(nèi)擴(kuò)增目標(biāo)基因或DNA時(shí)間段,是科研人員獲得目標(biāo)DN時(shí)間片段的常用技術(shù),在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。PCR儀樣品塊的溫度精度和均勻性是影響PCR反應(yīng)效果的重要因素。為了測(cè)量樣品塊的溫度均勻性及其它溫度參數(shù),要求測(cè)量工具必須具有多個(gè)測(cè)量通道,且具有很佳的測(cè)量精度、響應(yīng)速度、通道一致性和通道同步性。
關(guān)于PCR儀溫度校準(zhǔn)的詳細(xì)說(shuō)明：
（一）溫度準(zhǔn)確性
溫度準(zhǔn)確性是PCR儀重要的性能指標(biāo)，如溫度準(zhǔn)確性低可直接造成非特異性擴(kuò)增，甚錯(cuò)誤的擴(kuò)增結(jié)果，造成假陽(yáng)性和假陰性。
市場(chǎng)上各家廠商考核基因擴(kuò)增儀（PCR儀）性能的主要指標(biāo)，一般廠家的企業(yè)指標(biāo)為±0.5℃，一些性能較好的產(chǎn)品可以實(shí)現(xiàn)的溫度準(zhǔn)確度為±0.3℃。故需對(duì)PCR儀控溫準(zhǔn)確度進(jìn)行測(cè)試。
校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)平均溫度的計(jì)算公式為：I—參加檢測(cè)的溫度探頭序號(hào)；n—參加檢測(cè)的溫度探頭的數(shù)量
（二）溫場(chǎng)均勻性
由于PCR儀加熱器加熱不均勻，導(dǎo)致PCR儀模塊上各孔存在一定溫差。造成試驗(yàn)結(jié)果偏差。一般PCR儀邊緣點(diǎn)的溫度低于中間區(qū)域，所以均勻性為PCR儀重要的性能指標(biāo)。一般廠家的企業(yè)指標(biāo)規(guī)定均勻性為±0.5℃，一些性能較好的產(chǎn)品可以實(shí)現(xiàn)的溫度均勻度為±0.3℃。
校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)時(shí)，通過(guò)選取孔板中16個(gè)特殊反應(yīng)位置來(lái)測(cè)量溫度，并得出孔板的溫度均勻性。均勻性為各個(gè)探頭在同一時(shí)刻大溫度與小溫度的差值。均勻度計(jì)算公式為：tmax-tmin（tmax =大溫度；tmin =小溫度）
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PCR擴(kuò)增產(chǎn)物數(shù)量的多少?zèng)Q定了PCR的效率。為了在短時(shí)間內(nèi)獲得盡可能多的產(chǎn)物，需要儀器在升降溫段具有按照預(yù)設(shè)升降溫速率快速升溫和降溫的能力（大升溫速率達(dá)15~20℃）。一個(gè)完整的PCR過(guò)程，是由若干個(gè)升溫→恒溫→降溫循環(huán)構(gòu)成的。因?yàn)?ldquo;變性”，“退火”和“延伸”3個(gè)階段是必須要保證的。因此，只有使升降溫的過(guò)程盡可能地迅速，才能縮短每個(gè)PCR循環(huán)以及整個(gè)PCR 過(guò)程所需時(shí)間。一般廠家的企業(yè)指標(biāo)規(guī)定升溫速率為±3℃/sec。
PCR儀溫度校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)中，升溫速率為溫度從40℃到90℃的時(shí)間；降溫速率為溫度從70℃到35℃的時(shí)間。
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